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吖啶酯的应用

吖啶酯类化合物在生命科学领域中的应用日趋广泛,主要原因是它的发光效率高;反应条件温和,只需要H2O2和稀碱性,无需加入催化剂即可激发化学发光(CL).该类化合物CL反应机理的突出特点是参与反应的发光基团与修饰基团解离,发光效率不受连接臂长短的限制,光碎灭效应较小.通过对其结构的改造,大大增加了吖啶酯类化合物参与建立超微量免疫化学分析的可能性[1].由于生物体系成份极为复杂,置身于其中的CL化合物的反应动力学不同于实验条件下的反应动力学,故数据分析系统参数处理的优化十分必要.再者,示踪化合物和原始抗原结构上的微小差异,造成了针对其特异的抗体亲和常数不同.以高灵敏度和高精密度为基础的超微量免疫化学分析必需进行抗体工作浓度的最佳化构建.作者在合成和评价了吖啶-9-梭酸(4-氨乙基)-苯酯(AEPAC)和TO一3一AEPMAC的基础上,就TO一3一AEPMAC测量参数和辜酮抗体工作浓度的优化进行分析.

关于吖啶酯的应用

1 吖啶酯发光法测定组织型纤溶酶原激活剂活性的研究

血栓疾病为危害人们生命安全的主要疾病之一,在几种研究较多的纤溶药物中,组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)由于其纤溶作用的特异性而倍受医学界的青睐。机体的许多组织中含有t-PA,但因量少,无法大量提取。国外已有基因工程

产品用于临床,国内正在加紧研制t-PA基因工程产品,急需建立灵敏、简便、成本低廉的检测方法。目前国内成功地合成了吖啶酯,并对吖啶酯的性质做出全面分析,为建立灵敏度高、成本低廉的t-PA活性定量法提供了有利条件。本方法用于测定人黑色素瘤细胞t-PA(mt-PA)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)表达的rt-PA,获得与纤维蛋白琼脂板测定法(FAPA)相一致的结果;测定健康人静脉血流阻断前、后血浆中t-PA活性的变化,显出明显差别。用该法测定肺癌患者血浆t-PA活性,结果明显高于正常人。因此,该法可望用于对某些疾病的临床诊断与基础理论研究。

2 黄嘌呤氧化酶一乙醛一吖啶化学发光分析新体系[2]

在黄嗦吟氧化酶的催化作用下,乙醛被空气中的氧氧化为乙酸,同时产生过氧化氢;酶反应产生的过氧化氢在碱性介质中,氧化新吖啶酯发光剂10一甲基一9一(对甲酞苯基)吖啶酯氟磺酸盐,产生化学发光,反应式如下:

化学发光反应机理为[s],在碱性介质中,过氧化氢阴离子(HOO一)进攻吖啶环的9一位碳原子形成吖啶酯的过氧化物(I),该过氧化物进行分子内成环反应生成具有1.2一二氧四环酮的吖啶化合物(,),化合物(,)分解形成激发态的9一甲基吖啶酮(IV),回到基态时则产生强的发光现象.酶联化学发光反应产生的发光强度与乙醛浓度成正比,由此定量测定乙醛.

3 吖啶酯标记抗体应用于结核病人抗体水平的测定

吖啶1kg抗体偶联物可应用于细菌、病毒对人体产生的抗体以及人体自身免疫病所产生的抗体的测定。目前已被公认的自身免疫病至少有30多种。只要制备该疾病的抗原,用以包被固相,利用吖啶酯人IgG抗体标记物即能进行测定,为临床诊断和研究发病机理提供有意义的资料

70年代建立起来的化学发光免疫测定法(cLIA)(l〕是利用标记物的化学发光反应进行免疫复合物的测定。此法特异性强、灵敏度高,而且不使用同位素。常用的发光剂有鲁米诺、鲁米诺的衍生物(如氨基乙基丁基异鲁米诺,简称ABEI)、光泽精、草酸盐等。目前国内用得较多的是ABEI。由于在测定体系中需加入催化剂,致使本底较高,因而影响其灵敏度。

80年代Patel等o采用叮吮醋(AE)为发光剂,改进了标记方法,从而提高了测定的灵敏度。本文制备了nT咤醋羊抗人IgG抗体偶联物,建立了IgG固相发光免疫测定法(CLIA),并应用于结核病人抗体水平的测定。