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AMPPD发光显色试剂盒

发布时间:2021-7-16 访问人数: 169

AMPPD发光显色试剂盒

简介:

AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物,在适宜的缓冲液中,随着酶的催化水解作用,AMPPD分解成AMP-D,后者发出强度很高的光信号,其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时,便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。乙醇胺可使光信号输出更理想。AMPPD为1,2-二氧环已烷衍生物,它是一种生物化学领域中最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物,其特点:反应速度快,在很短时间内提供正确可靠的结果。在它的分子结构中有两个重要部分,一个是联接苯环和金刚烷的二氧四节环,它可以断裂并发射光子;另一个是磷酸根基团,它维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下,这种化合物很稳定。但是,结果有碱性磷酸酶存在,Dioxetane Phosphate作为酶的底物会在酶的催化一脱去磷酸根基团,形成一个不稳定的中间体。这个中间体随即自行分解(二氧四节环断裂),同时发射光子。 AMPPD发光显色试剂盒适用于PVDF膜,不推荐用于硝酸纤维素膜。

编号

名称

PW0071

25T

PW0071

50T

Storage

试剂(A):

Dioxetane Buffer

A1: Dioxetane A

50ml

100ml

-20℃

A2: Dioxetane B

50ml

100ml

-20℃

临用时,取A1、A2混合,即为Dioxetane Buffer,不可预先配制。

试剂(B): AMPPD

2.5mg

5mg

-20℃ 避光

组成:

自备材料:

1、转印了蛋白并已以抗体-酶复合物检测过的PVDF膜

2、Tris盐缓冲液(TBS)

3、透明的塑料保鲜膜

4、蒸馏水

操作步骤(仅供参考)

临用前,取适量的A1和A2,混合后获得Dioxetane Buffer。

AMPPD溶于Dioxetane Buffer, 配制AMPPD底物溶液即为AMPPD Dioxetane Buffer(发色发光显迹液),用于膜的染色。

取适量Dioxetane Buffer洗膜。

对于PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应, 膜置于新鲜配制的AMPPD Dioxetane Buffer 作用。

将膜移入适量的AMPPD Dioxetane Buffer中,浸泡(AP反应)。

取出PVDF膜,滴干水分,将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上,向后折叠将膜包裹起来,成为不漏水的封闭体。

在暗房中,将膜正面朝下放在感光胶片上,曝光数秒至数小时。

如需要,在室温下以适量的TBS洗膜。

将膜放入AMPPD Dioxetane Buffer

10、用蒸馏水洗膜,终止反应。晾干后拍照留永久的记录。

注意事项:

PVDF膜置于胶片上后,不要改变位置。

曝光时间应根据实验情况,自行摸索。

配制好的AMPPD Dioxetane Buffer,应避光低温保存。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期: 12个月有效。

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